Resumo
A presente proposta trata-se do desenvolvimento de um kit de diagnóstico para COVID-19 baseado em RT-LAMP com detecção visual do resultado final. A detecção visual dos resultados é baseada no uso de indicador de pH que muda de cor quando a reação de amplificação do RNA ocorre, ou seja, para amostras positivas. Quando a reação de amplificação do RNA se desenvolve na solução, o pH diminui e altera a cor da solução. Dessa forma a solução permanece violeta quando não há a presença do alvo e muda para amarelo quando a há a presença da amplificação do vírus SARS-CoV-2. A detecção visual dos resultados baseada na mudança de cor torna a leitura e interpretação dos resultados uma etapa rápida e simples. Além disso, o kit desenvolvido neste projeto é capaz de realizar o teste de diagnóstico diretamente em amostras de swab, dispensando a etapa de extração de RNA.
Por ocorrer isotermicamente, a reação RT-LAMP não necessita de equipamentos sofisticados. Para a realização do teste é necessário apena um bloco simples de aquecimento.
Levando tudo isso em consideração: 1) instrumentação simples, 2) teste realizado sem a necessidade de extração de RNA e 3) leitura visual dos resultados baseado no uso de indicador de pH, o kit desenvolvido neste projeto é caracterizado como um teste de baixo custo, além de rápido.
O desenvolvimento e otimização da formulação do kit envolve o uso de primers específicos para covid-19 juntamente com as enzimas, nucleotídeos, indicador de pH e sais.
O kit desenvolvido neste projeto tem potencial para uso no point-of-care e pode auxiliar na testagem em massa no Brasil, por ser um kit de baixo custo.